样品制备
我们可以接受的样品形式为
1、PVDF膜结合的样品(请提供整膜)
2、HPLC纯化后的冻干粉样品。
以下建议会有助于您准备您的蛋白测序的样品,这些意见适用于几乎所有的纯化方法。
1、样品不能含有下列会干扰蛋白测序的物质:
去污剂(Detergents)/ 盐分(Salts)/ 非挥发性缓冲液(Non volatile buffers)
胺(Amines)/ 氨基酸(Amino acids)
2、避免因吸附而导致的样品丢失:
当分离纯化小量的蛋白时,样品的回收率往往较低,很大的一个原因是由于表面吸附,下面一些小窍门有助于解决这个问题:避免透析 / 不要让样品干透,用尽可能小的管 / 特殊的疏水性蛋白,最多可加SDS 至0.05 %以减少吸附损失。
3、在SDS-PAGE 电泳纯化蛋白时,注意下面一些事项能更好的保证样品制备的成功率:
1) 每三至四周配置一次丙烯酰胺储液,用所能得到的最好的试剂和水;
2) 用尽可能薄的胶来分离,最好聚合过夜使胶聚合充分,上样之前预电泳数分钟;
3) 充分上样,使每条带能有1-5 ug的目的蛋白
样品信息
送达我们的样品请注明以下信息:
1、 量。 我们要求提供至少20pmol, 希望提供50-100pmol,以便我们有足够的量重复实验。但经验告诉我们,客户提供给我们的样品经常是被高估了样品的量,我们推荐将已定量的标准蛋白做一系列稀释,同样品一起分道电泳,这样有助于准确估计样品的数量级。
2、 纯度。 无论液相样品或转膜样品,最少得达到75%的纯度(基于摩尔数),重要的一点,所有的样品不能含有任何非挥发性的缓冲液、避免氨基酸污染(Tris- glycine缓冲体系不合适),绝对不能含有盐分或去污剂。推荐您拿给我们的样品的最后一步用反向HPLC制备。
3、 其他信息。期望测得的氨基酸个数 / 分子量 / 组织来源 / 制备方法等
价格
开机费:¥1600元,含前五个氨基酸测序的费用;此部分款项需预付,无结果不再退还。 每循环:¥248元